锐赛生物

靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示肿瘤个性化治疗项目QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往期精品SCI漂亮SCI案例库科研转化成果u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台公司新闻价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉业务招商诚觅英才内部推荐加入我们留言板联系我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料促销活动
CCK-8 细胞增殖与毒性检测试剂盒

产品简介

  • CCK-8试剂盒EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒EBET易博真人|平台。

  • WST-8是一种类似于MTT的化合物EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,在电子耦合试剂1-MethoxyPMS存在的情况下EBET易博真人|平台,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan) (1)EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。细胞增殖越多越快EBET易博真人|平台,则颜色越深;细胞毒性越大EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,则颜色越浅EBET易博真人|平台。对于同样的细胞EBET易博真人|平台,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

1. WST-8 分子结构式及其检测原理

产品优势:

本试剂盒提供了一种灵敏度高EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、操作简便、使用安全的细胞增殖与毒性检测方法EBET易博真人|平台。与传统的 MTT 实验相比具有明显的优势:

  • CCK-8 法是用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测EBET易博真人|平台,也可以用于抗癌药物等对细胞有

  • 毒试剂诱导的细胞毒性检测EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等与细胞活性和增殖相关的实验的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法

  • CCK-8 法对细胞无毒性,可以多次测定选取最佳测定时间 EBET易博真人|平台,与 MTT 方法相比线性范围更宽EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,灵敏度更高

  • CCK-8 溶液不需配制EBET易博真人|平台,可以直接加入到细胞样品中EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,即开即用,比 MTT 更加稳定

  • 实验结果重复性好EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,适合大规模,高通量的样品检测

  • MTT 实验生成的 formazan 不是水溶性的EBET易博真人|平台,需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解而本方法产生的 formazan 是水溶性的EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差

产品包装:

产品货号

规格

数量

D002-1

50

0.5ml×1

D002-2

500

1ml×5

D002-3

10000

25ml×4


贮藏条件:

CCK-8 溶液在避光、0-5°C的条件下可以保存 1 年EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,若长期不用可在-20°C下避光保存 2 年EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。建议分装后保存于-20°CEBET易博真人|平台,使用时提前于 4°C解冻,请避免反复冻融,否则增加背景值EBET易博真人|平台,干扰实验结果EBET易博真人|平台。


所需的设备及耗材:

  • 10ul、100-200 ul 以及多通道移液器

  • 酶标仪(带有 450 nm 滤光片)

  • 96 孔培养板

  • CO2 培养箱


使用方法:

  1. 96孔板中接种细胞悬液(100ul/)EBET易博真人|平台,通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞,细胞毒性实验每孔约5000个细胞EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

  2. 按照实验需要EBET易博真人|平台,进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激EBET易博真人|平台,处理一段适当的时间 (例如:6,12, 2448小时)EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  3. 每孔加入10ul CCK-8溶液EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。如果起始的培养体积为200ulEBET易博真人|平台,则需加入20ul CCK-8溶液EBET易博真人|平台,以此类推EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台?EBET易博真人|平台?梢杂眉酉嘤α肯赴嘌?/span>CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的药物会干扰检测EBET易博真人|平台,需设置加相应量细胞培养液EBET易博真人|平台、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

  4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间可以通过预实验确定EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。预实验时可以在0.5EBET易博真人|平台、1EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、24小时后分别用酶标仪检测EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,若无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,可以使用大于600nm的波长EBET易博真人|平台,例如650nmEBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,作为参考波长进行双波长测定。

  6. 如果需要暂时不测定O.D值EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/vSDS溶液,避光保存在室温EBET易博真人|平台,24小时内吸光度不会发生变化EBET易博真人|平台。

注意事项:

  1. 使用 96 孔板进行检测时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题EBET易博真人|平台?EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台?山?96 孔板外围一圈加培养基EBET易博真人|平台、水或 PBS 保湿EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。同时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,可以把 96 孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  2. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同EBET易博真人|平台。在正式实验前EBET易博真人|平台,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入 CCK-8 试剂后的培养时间。

  3. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,建议铺板过程中注意时?EBET易博真人|平台;煸?,防止因细胞沉淀造成不均匀EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。加入 CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基 和CCK-8 溶液充分混匀EBET易博真人|平台。

  4. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响EBET易博真人|平台。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

  5. 加入 CCK-8 时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,如果细胞培养时间较长EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,培养基颜色或 pH 值已变化,建议换用新鲜的培养基EBET易博真人|平台。

  6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡EBET易博真人|平台,否则会干扰测定EBET易博真人|平台。

  7. 本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中EBET易博真人|平台,请在生物安全柜内无菌操作EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,避免污染。

  8. 为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作EBET易博真人|平台。

参考文献:

  1. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferationand cytotoxicity assays. Mosmann T (1983).Journal of Immunological Methods. 65:55–63.

  2. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator forNADH as well as cell viability,Talanta,44, 1299-1305, 1997.

  3. A Vital Role for Ape1/Ref1 Protein in Repairing Spontaneous DNA Damage in HumanCells, Molecular Cell, 17, 463-470, 2005.

  4. 4. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway inTHP-1 cell line. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Life Science Journal.Vol.5,No.2, 2008.

 
 
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