锐赛生物

靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示肿瘤个性化治疗项目QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往期精品SCI漂亮SCI案例库科研转化成果u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台公司新闻价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉业务招商诚觅英才内部推荐加入我们留言板联系我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料促销活动

临床医学创新EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,转化造?;颊?/span>

动物实验EBET易博真人|平台、载体构建EBET易博真人|平台、细胞实验EBET易博真人|平台、病理学检测、免疫沉淀EBET易博真人|平台、核酸蛋白分析

联系电话:

021-80158420

组织样本处理

sample processing



组织样本处理服务包含:石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片/涂片


技术原理


石蜡切片(paraffin section)是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中EBET易博真人|平台?;畹南赴蜃橹辔奚该?,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出EBET易博真人|平台;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,失去原有正常结构EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,因此EBET易博真人|平台,组织要经固定EBET易博真人|平台、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,而能清晰辨认其形态结构EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片EBET易博真人|平台。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的EBET易博真人|平台。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间EBET易博真人|平台。同时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,由于此法不需要经过脱水EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、透明和浸蜡等步骤EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,因而较适合于脂肪EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、神经组织和一些组织化学的制片EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,并作为快速切片的方法应用在临床诊断


6.png


特点


石蜡切片标本可以长期保存使用EBET易博真人|平台,为永久性显微玻片标本。

冰冻切片制作过程较石蜡切片快捷EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、简便EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,而多应用于手术中的快速病理诊断.组织变化不大,能很好保存脂肪EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,类脂等成分EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类EBET易博真人|平台,特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。


石蜡切片(paraffin section)


组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,也是病理学和法医学等学科用以研究EBET易博真人|平台、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法EBET易博真人|平台,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。教学中EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台?EBET易博真人|平台;畹南赴蜃橹辔奚该?,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,因此EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,组织要经固定EBET易博真人|平台、石蜡包埋EBET易博真人|平台、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构EBET易博真人|平台。


(一)石蜡切片前的准备


  1. 切片刀。传统的切片刀在使用之前EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,一定要在显微镜下检查刀口的损伤程度EBET易博真人|平台,然后进行磨刀。现在也可以使用一次性刀片,可省去磨刀。

  2. 修整蜡块:切去组织周围过多的石蜡,一般情况下在组织周围留有约1~2mm的石蜡边,两边必须平行EBET易博真人|平台。

  3. 蜡块固定:修整好的蜡块先固定在事先准备好的小方木块或者金属块上EBET易博真人|平台,固定方法是把蜡铲先在酒精灯上加热EBET易博真人|平台,再将蜡块底部烙熔EBET易博真人|平台,迅速烙粘在小方木块或金属块底座上EBET易博真人|平台。

  4. 载玻片擦洗干净后EBET易博真人|平台,在其表面涂上粘附剂(蛋白甘油EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、APES或多聚赖氨酸)EBET易博真人|平台,根据染色方法选择不同的粘附剂EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  5. 准备好毛笔EBET易博真人|平台、镊子EBET易博真人|平台、染色架。

  6. 调好展片器内水的温度(45℃)EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,有时也可以加些酒精到水中。


(二)蜡切片


  1. 将切片刀装在刀片机的刀架上并固定紧EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,固定蜡块底座或蜡块,调整蜡块与刀至合适位置EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,刀刃与蜡块表面呈5度角。

  2. 切片多使用轮转式切片机EBET易博真人|平台,切片时EBET易博真人|平台,左手执毛笔EBET易博真人|平台,右手转切片机转轮,先修出组织块EBET易博真人|平台。

  3. 调整切片机上的切片厚度为4~7μmEBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,然后切片EBET易博真人|平台。

  4. 切片可以是单张EBET易博真人|平台,也可以是连续切片形成蜡带

  5. 展片和捞片:

    (1)直接展片法:在载玻片上滴加几滴蒸馏水EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,然后把切片铺在小滴上面EBET易博真人|平台,用酒精灯在载玻片下面加热,待完全展平EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,倾斜载玻片,倒弃多余水分EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,同时摆正切片EBET易博真人|平台。

    (2)温水漂浮法:此法用展片机或者用恒温水浴箱,先使水温保持在45~50℃,用左手拿毛笔轻轻托起切片EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,用右手用眼科镊子夹起切片的一角EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,正面向上轻轻平铺放置于展片器的水面上EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,动作要轻快EBET易博真人|平台,切好的石蜡切片漂浮在温水中受热后及在表面张力的作用会自然平整地展开EBET易博真人|平台,必要时可用眼科镊轻轻拔开EBET易博真人|平台,然后捞片EBET易博真人|平台,并及时编号EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  6. 展好的切片在室温下稍微干燥后EBET易博真人|平台,放在40℃恒温烤箱中,小片组织30分钟即可EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,大的需12~24小时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,烤干备用。


(三)注意事项


  1. 切片刀刃倾斜过大或过小都不能正常进行切片。

  2. 修整蜡块时要细心EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,看清楚组织在蜡块中的位置EBET易博真人|平台,以免将需要的组织修掉EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  3. 连续转动切片机的转轮时,速度一定要均匀,不能时快时慢,以免切片厚薄不一EBET易博真人|平台。

  4. 使用轮转式切片机切片时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,是由下向上切,为得到定然整的切片EBET易博真人|平台,防止组织出现刀纹裂缝EBET易博真人|平台,应将组织硬EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、脆难切的部分放在上端EBET易博真人|平台,如皮肤应将表皮部分向上EBET易博真人|平台,肠胃等组织应将浆膜面面朝上EBET易博真人|平台。

  5. 用展片器展片时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,水温应根据使用的石蜡熔点进行了调整EBET易博真人|平台,一般低于石蜡熔点10~15℃EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台;捞片的时候动作要轻EBET易博真人|平台、稍快EBET易博真人|平台。动作太大容易出现气泡EBET易博真人|平台。如果没有展片器可以用温水浴锅来代替EBET易博真人|平台。

  6. 单个切片要摆到载玻片的1/3与2/3交界处EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台;连续切片的粘片顺序一般是从左到右EBET易博真人|平台,组织切片较小是,可以并列粘贴2~3条蜡带EBET易博真人|平台。

  7. 烤片的温度不宜过高EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台;烤片的时间要合适EBET易博真人|平台。脑组织要待稍微晾干一些后,才能烤片EBET易博真人|平台,否则容易产生气泡影响染色和观察EBET易博真人|平台。

石蜡.jpg


冰冻切片(frozen section)


冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片EBET易博真人|平台。它实际上是以水为包埋剂EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,大大缩短了制片时间EBET易博真人|平台。同时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,由于此法不需要经过脱水EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台、透明和浸蜡等步骤,因而较适合于脂肪EBET易博真人|平台、神经组织和一些组织化学的制片EBET易博真人|平台,并作为快速切片的方法应用在临床诊断EBET易博真人|平台。

  1. 取材:  应尽可能快地采取新鲜的材料EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,防止组织发生死后变化EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

  2. 速冻:  为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需   要,一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,使组织温度骤降,缩短降温的时间,减少冰晶的形成。  液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内(直径约2cm)EBET易博真人|平台,如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾,此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-20s组织即迅速冰结成块。在制成冻块后,即可置入恒冷箱切片机冰冻切片EBET易博真人|平台。若需要保存EBET易博真人|平台,应快速以铝箔或塑料薄膜封包EBET易博真人|平台,立即置入-80℃冰箱贮存备用。

  3. 固定:  样品托上涂一层OCT包埋胶EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,将速冻组织置于其上EBET易博真人|平台,4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。  取下组织置于锡箔或者玻片上EBET易博真人|平台,样品托速冻。  组织置于样品托上EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,其上再添一层OCT胶,以完全覆盖为宜,速冻架(PE)上30minEBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。

切片:  恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机EBET易博真人|平台,其基本结构是将切片机置于低温密闭室内EBET易博真人|平台,故切片时不受外界温度和环境影响EBET易博真人|平台,可连续切薄片至5-10μmEBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。切片时EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,低温室内温度以-15℃~-20℃为宜EBET易博真人|平台,温度过低组织易破碎EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,抗卷板的位置及角度要适当EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,载玻片附贴组织切片,切勿上下移动。切好室温放置30min后EBET易博真人|平台,入4℃丙酮固定5~10minEBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,烘箱干燥20min。PBS洗5min×3EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台。进行抗原热修复EBET易博真人|平台,微波热修复也可EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,室温自然冷却BET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台?捎?%H2O2孵育5~10minEBET易博真人|平台,消除内源性过氧化物酶的活性EBET易博真人|平台。

冰冻.jpg


细胞爬片


就是让玻片浸在细胞培养基内EBET易博真人|平台,细胞在玻片上生长,主要用于组织学EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,免疫组织化学,冰冻切片EBET易博真人|平台,细胞涂片,原位杂交等.

细胞爬片特点

1.玻片表面经过TC处理EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台EBET易博真人|平台,双面均可使用

2.γ射线灭菌,保证无菌.

3.使用便捷,只需打开包装,将爬片放入孔板内,将细胞悬液滴到爬片上即可培养.

4.爬片厚度为0.17mm,直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板

5.超强吸附:该玻片表面具有永久的阳离子电荷,可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞,使之粘附在玻片上,进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此EBET易博真人|平台,无需粘黏剂或者蛋白包被EBET易博真人|平台,该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。

操作注意

使用细胞爬片时(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少)

比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中.


爬片.jpg



 
 
 工作时间
周一至周五 :9:00-18:00
 联系方式
客服热线:18721441876
客服热线:19901723637
邮箱:service@research-bio.com
注:不用QQ的可点击微信或网页右侧在线咨询
微信咨询

微信咨询

副标题

 
 
 
 

微信1.jpg


         

沪公网安备 31011502005995号